Преброяване на левкоцитите в камерата по формулата на Goryaeva. Изтеглете книгата "Клинични лабораторни изследвания" (2.84Mb)

Преброяването на левкоцитите в камерата на Горяев е един от начините за определяне на броя им в кръвта на пациента. Броят на левкоцитите зависи от много фактори, които включват скоростта на образуване, освобождаване от костния мозък и разрушаване. Всички тези процеси са пряко повлияни от физиологични фактори. Поради това постоянната промяна в броя на левкоцитите в здрав човеквъзможно. Това е особено очевидно при сравняване на резултатите от сутрешните и вечерните тестове.

Метод за преброяване на левкоцитите в камерата на Горяев

Този метод с епруветка се състои от следните стъпки:

1. Епруветката се напълва с 0,4 ml оцетна киселина и тиазиново багрило. С помощта на капилярна пипета се вземат 20 µl прясна кръв и се издухват в същата епруветка. Получената смес се разбърква старателно.
2. Тънка стъклена плоча, разположена в камерата, се избърсва внимателно, след което се образуват дъгови петна.
3. След това капка от получения разтвор се взема от кръвта с оцетна киселина и се довежда до ръба на чинията.
4. След като камерата се напълни, тя се оставя необезпокоявана за една минута, за да може белите кръвни клетки да започнат да се утаяват.
5. При малко увеличение се броят левкоцитите.

За да получите правилни резултати, използвайте специална формула за преброяване на броя на левкоцитите в 1 μl кръв. За норма се считат от 4 до 9 на 10 литра.

Ако резултатът надвишава тази марка, пациентът се диагностицира с левкоцитоза. Ако има намаление - левкопения. Но това е на теория; в действителност трябва да разгледате други показатели, за да определите точно заболяването.

За преброяване на левкоцитите се използват три вида формули:

• За 64 празни квадратчета

N = m x 4000 x 20/(64 x 16) = m x 78,13 ≈ m x 78

• За 169 празни квадрата

N = m x 4000 x 20 / (169 x 16) ≈ m x 29,6

• За 100 празни квадратчета

N = m x 4000 x 20 / (100 x 16) ≈ m x 50.

Камерата Goryaev е устройство, което може най-точно да преброи броя на левкоцитите, както и други подобни частици. Състои се от специално дебело стъкло с правоъгълна камера. Съдържа микроскопична мрежа и тънко оптично стъкло.

Това устройство е разработено от известния професор Николай Константинович Горяев, работил в Казанския университет. Неговата специфична решетка дава по-точни резултати от камерите на други известни учени.

Що се отнася до поддръжката на камерата, тук също има някои нюанси. По време на почивките в работата камерата на Горяев трябва да е на сухо място. Когато работата е завършена, тя трябва да бъде обработена. За целта апаратът се потапя в етанол(70%) за половин час. Друг вариант за почистване е разтвор на формалдехид (4%) за един час. Последният етап е измиване на камерата Goryaev с дестилирана вода и избърсване с мека кърпа.

Има случаи, когато при ниски нива в тялото на пациента всичко е наред. Това предполага, че основният резерв от левкоцити е в тъканите. Такива хора имат много слабо предразположение към различни заболявания, така че рядко се разболяват. Това е предимно наследственост.

Левкопения и левкоцитоза

Възможно е също така да се предположи, че пациентът има диагноза левкопения с помощта на камерата Goryaev. Дели се на органичен и функционален.

Функционалните отклонения включват:

• заболявания на вирусна или бактериална етиология (чревни инфекции, хепатит А и др.);
• реакция към определени лекарства;
• с тежко натоварване на мускулите, стрес, диети;
• с неправилно съхранение на кръв.

Органичните причини включват:

• панмиелофтиза;
• левкемия;
• болест на Ходжкин;
• ревматично заболяване;
• йонно облъчване;
• агранулоцитоза.

Тялото реагира с левкоцитоза, когато е повлияно от ендогенни и екзогенни фактори. В практиката се разграничават физиологични и патологични форми на заболявания.

БРОИТЕЛНИ КАМЕРИ- устройства за преброяване на формените елементи на кръвта, урината и цереброспинална течност, както и микроорганизми. Предложено от К. с. френски физиологът L. Ch. Malassez през 1874 г

К. с. Представляват дебело предметно стъкло с вдлъбнатина, на дъното на която е гравирана решетка за броене; Върху вдлъбнатината се поставя покривно стъкло от шлифовано стъкло. Постоянна височина на К. с. се осигурява чрез плътно триене на покривното стъкло и предметното стъкло, докато се образуват дъгови нютонови пръстени (интерферентни ленти).

Структурните елементи на всички видове решетки са големи и малки квадрати. Решетки различни видове- Том, Бъркър, Предтеченски, Тюрк, Нойбауер, Горяев, Фукс - Розентал и др. - се отличават с различни групи от големи и малки квадрати.

Известни количества - височината на камерата, площта на решетката и нейните разделения и разреждането на взетата за изследване кръв - позволяват да се изчисли броят на формираните елементи в определен обем (1 μl) кръв (или друг носител).

Има отворени и затворени К. с. IN затворена камераПокривното стъкло се протрива след пълненето и това може да причини въздушни мехурчета да попаднат в него. Такива К. с. (Thomas - Zeiss с решетка Tom, Dunger със специална решетка) са неудобни за работа и не се използват.

Отворените камери (фиг. 1) се пълнят след триене на покривното стъкло. Имат две решетки на един слайд. Плочите с гравирани решетки са разделени с жлебове една от друга, както и от останалата част на слайда. Наличието на жлебове позволява да се регулира пълненето на камерите. Някои камери са оборудвани с метални скоби, които закрепват покривното стъкло.

Отворете K. s. за първи път описан от S.P. Alferov през 1883 г., след това през 1905 г. от K. Burker. Известни са откритите преброителни камери на Ключарев, Гаусер и Леви, Гелбер, Глауберман. В СССР широко се използват камерите за броене на Горяев и Фукс-Розентал. Камерата на Горяев с мрежата на Горяев (фиг. 2) има обем от 0,9 µl, площта на окото е 9 mm 2. Мрежата се състои от 225 големи квадрата; от тях 100 са празни, 25 са разделени на 16 малки квадрата, 100 са разделени на ивици.

Камерата за броене на Fuchs-Rosenthal с решетка на Fuchs-Rosenthal (фиг. 3) има обем от 3,2 µl, площ на мрежата от 16 mm 2, състои се от 256 големи квадрата (квадратите, разделени от ивици, не се броят).

Метод на работа

Преди работа, плъзнете K. s. и покривното стъкло се измива под течаща вода чешмяна водаи избършете на сухо. След това покривното стъкло се втрива плътно върху камерата (докато се появят дъгови Нютонови пръстени, тъй като само при това условие обемът на капсулата е постоянен).

Съдържанието на епруветката се смесва няколко пъти, преди да се напълни камерата, след това се взема капка кръв от епруветката с разтопения край на стъклена пръчка, накланя се и се нанася върху предметно стъкло в самия ръб на капака стъкло. Ако една капка кръв не е достатъчна, за да запълни напълно кръвоносния съд, добавете още една капка. Ако се вземе кръв в миксера, тогава първите капки от капиляра на миксера се освобождават и K. s. напълнете с капка от ампулата на миксера. Останалата течност от предметното стъкло се отстранява с марлен тампон. Броенето започва след 3 минути. след напълване на камерата (през това време кръвните клетки се утаяват) под микроскоп при ниско увеличение (леща X 8, окуляр X 10 или X 15) и затъмнено зрително поле (със затворена диафрагма или с леко спуснат кондензатор). Преброяват се клетките, разположени вътре в квадрата (фиг. 4). Клетките, пресечени от страните на квадратите, се броят, както следва: ако повече от половината клетка е вътре в квадрата, тогава се брои; ако извън него, не се брои. Клетки, пресечени с линии точно в средата, се броят на две съседни, дясна и горна, линии от квадрати и не се броят на другите две. Когато се използват подходящи разтвори за разреждане, червени кръвни клетки, левкоцити, тромбоцити, еозинофили, базофили и ретикулоцити могат да бъдат преброени в камерата на Goryaev.

Червените кръвни клетки се преброяват в 80 малки квадрата, т.е. в 5 големи квадрата, разположени диагонално. Изчислението се извършва по формулата:

X = a*4000*200/80,

където a е броят на червените кръвни клетки, преброени в 80 малки квадратчета, 80 е броят на преброените малки квадратчета, 200 е степента на разреждане на кръвта, 4000 е множителят за получаване на съдържанието на червени кръвни клетки в 1 μl кръв ( обемът на малък квадрат е 1/4000 μl). На практика броят на червените кръвни клетки, преброени в 5 големи квадрата, се умножава по 10 000.

Левкоцитите се преброяват в 1600 малки квадрата (в 100 големи квадрата). Изчислението се извършва по формулата:

X = a * 4000 * 20 /1600,

където a е броят на левкоцитите, преброени в 1600 малки квадратчета, 1600 е броят на преброените малки квадратчета, 20 е степента на разреждане на кръвта, 4000 е множителят за получаване на съдържанието на левкоцити в 1 μl кръв. На практика броят на левкоцитите, преброени в 1600 малки квадратчета, се умножава по 50.

Тромбоцитите се преброяват в 400 малки квадрата (25 големи квадрата по диагонала на мрежата). Реагентите за разреждане могат да бъдат изотоничен разтвор на натриев хлорид, различни решения, запазвайки тромбоцитите и хемолизирайки еритроцитите.

Тромбоцитите се преброяват под конвенционален микроскоп и с помощта на фазово-контрастно устройство (вижте Фазово-контрастна микроскопия), за да се идентифицират по-ясно. След разреждане епруветката с кръв се оставя за 25-30 минути. за хемолиза на червени кръвни клетки. След това съдържанието на епруветката се смесва отново и се напълва с К., който се поставя за 5 минути. във влажна камера (напр. панички на Петри с влажна памучна вата), за да позволи на тромбоцитите да се утаят. Изчислението се извършва по формулата:

X = a*4000*200/400,

където a е броят на тромбоцитите, преброени в 400 малки квадратчета, 200 е степента на разреждане на кръвта, 400 е броят на преброените малки квадратчета, 4000 е множителят за получаване на съдържанието на тромбоцити в 1 μl кръв. На практика броят на тромбоцитите, преброени в 400 малки квадрата, се умножава по 2000.

Броят на базофилите и еозинофилите се преброява в камерата на Горяев в 1600 малки квадратчета, както и левкоцитите. Почти изчисленият брой базофили и еозинофили се умножава по 50.

Ретикулоцитите се преброяват в камерата на Горяев в 80 малки квадратчета, като червени кръвни клетки. На практика изчисленият брой ретикулоцити се умножава по 10 000.

Определянето на общия брой клетки в цереброспиналната течност (виж) се извършва най-добре в камера на Fuchs-Rosenthal (поради малкия брой левкоцити в цереброспиналната течност). Пребройте цялата мрежа (256 големи квадрата) под микроскоп с ниско увеличение (окуляр X 15, обектив x 8).

При много големи количестваклетки, е позволено да се преброи половината от мрежата (последвано от умножаване на резултата по 2). Изчислението се извършва по формулата:

X = a*11/3.2*10,

където a е броят на клетките, преброени в 256 квадрата, 11/10 е степента на разреждане, 3,2 е обемът на камерата в μl. На практика при броене в камера на Фукс-Розентал броят на левкоцитите се разделя на 3.

В камерата на Goryaev клетките на цереброспиналната течност се преброяват най-малко 3 пъти (също цялата площ), като всеки път камерата се запълва наново, след което се взема средното аритметично. Изчислението се извършва по формулата:

X = a*11/0,9*10,

където a е средноаритметичният брой клетки, преброени върху цялата мрежа, 11/10 е степента на разреждане, 0,9 е обемът на камерата в μl. На практика броят на преброените левкоцити се умножава по 1,2.

Количественото определяне на образуваните елементи в урината се извършва в камерите на Fuchs-Rozental, Goryaev: броене на еритроцити и левкоцити при средно увеличение на микроскопа, броене на цилиндри при ниско увеличение. Степента на разреждане на урината зависи от метода на изследване (виж Урина).

Преброяване в K. s. не съвсем точно. Грешката на метода варира от 10 до 20% в зависимост от броя на елементите, които се преброяват.

Условия за грижа и съхранение

Камерите трябва да бъдат защитени от замърсяване и прах от попадане върху мрежата. След работа камерата и покривното стъкло се измиват под течаща чешмяна вода и внимателно, но старателно се избърсват с чиста салфетка (или марля). След това го увиват в хартия и го поставят в кутия.

Библиография:Ръководство за клинични лабораторни изследователски методи, изд. Е. А. Кост, стр. 22, М., 1975.

Д. Н. Ишмухаметов

мл. Във Видалева епруветки с пипета

При добавяне на 0,02 ml кръв към 0,4 ml оцетна киселина се получава 20-кратно разреждане, което е необходимо за преброяване на левкоцитите.

За да се преброят формираните елементи, разредена кръв се поставя в камера за броене, в която клетките са подредени в един слой. Познавайки обема на камерата и разреждането на кръвта, се изчислява броят на формираните елементи в 1 литър кръв.

Дизайнът на камерата и решетката на Goryaev. Камерата на Goryaev (фиг. 37) е дебело стъкло, прорязано през четири напречни канала. Жлебовете разделят стъклото на плочи - две странични и една средна. Средната пластина е с 0,1 мм по-ниска от страничните. Разделен е с напречна бразда на 2 равни части. На всяка половина на средната плоча се прилага решетка на Горяев.

Камерата е оборудвана с покривно стъкло от шлифовано стъкло. Трябва да се нанесе така, че да покрива както страничните, така и средните плочи. Натискайки ръбовете на стъклото с палци, го разтривайте в страничните плочи, докато се появят дъгови пръстени (пръстени на Нютон).

Тъй като страничните плочи са по-високи от средната, между тях и покривното стъкло остава празнина. Това е камерата, в ЩШ

която е пълна с разредена кръв. Дълбочина на камерата 0,1 мм.

Решетката на Goryaev, приложена към дъното на камерата, е квадратна. Страната му е 3 mm, площта е 9 mm2. Мрежата е разделена на 225 големи квадрата - 15 хоризонтално и 15 вертикално. Част от големите квадрати (всеки два до трети) е разделена на 16 малки квадрата. Страната на малък квадрат е 1/20 мм (фиг. 38).

Техника на броене. Правилното запълване на преброителната камера с разредена кръв гарантира точността на преброяването на образуваните елементи. Преди да се напълни камерата, съдържанието на епруветката се смесва чрез въртене между дланите в продължение на 2 минути. Разредената кръв се нанася върху средната пластина на камерата, като се използва пипета на Пастьор с балон или стъклена пръчка, като се поставя близо до ръба на покривното стъкло. Според закона за капилярността течността тече под стъклото, изпълвайки камерата.

След напълване камерата трябва да се постави на масата за 2-3 минути, докато движението на течността в нея спре и клетките се разположат неподвижно на фона на квадратите на решетката. При пълнене на камерата течността не трябва да тече в жлебовете. Въздушните мехурчета не трябва да влизат в камерата.

Броенето се извършва под микроскоп с малко увеличение (увеличение 8, приблизително 10 или 15), кондензаторът трябва да бъде спуснат и диафрагмата затворена.

Броенето на червените кръвни клетки се извършва в 5 големи квадрата на решетката на Горяев, разделени на 16 малки и разположени диагонално. Последното условие се дължи на факта, че фасонните елементи не са разпределени абсолютно равномерно върху мрежата и трябва да се броят в различните й участъци.

Броенето на левкоцитите се извършва в 100 големи неразделени квадрата, разположени в мрежата в групи от четири.

За да избегнете преброяването на едни и същи клетки, лежащи на граничните линии два пъти, трябва да наблюдавате следвайки правилата: клетки, които имат повече от половината си вътре, принадлежат на даден квадрат; клетките, разделени наполовина с гранична линия, се броят само на горната и лявата граница на квадрата; клетки, които лежат с по-голямата част от половината си навън даден квадратТе изобщо не се броят.

След преброяване на червените кръвни клетки в камерата се определя техният брой в 1 μl кръв. За да направите това, броят на червените кръвни клетки, получен по време на изчислението, се умножава по 10 000. Този коефициент се получава чрез следното изчисление: 1 голям квадрат от решетката съдържа 16 малки, а 5 големи квадрата съдържат 80 малки (16-. 5). Малка квадратна страна

е равно на "/th mm, а площта му е "/i-"/20="/"около mm2. Височината на камерата е "/th mm, следователно обемът на кръвта над малкия квадрат е:

1 1 1 h 400 "l0 4000 MM Ако броят на червените кръвни клетки, преброени в 5 големи квадрата или 80 малки квадрата, се означи с буквата a, тогава броят на червените кръвни клетки в един малък квадрат ще бъде

равни. Както е посочено, обемът на кръвта над малкия квадрат

е равно на -- mm3, следователно, за да разберете броя на червените кръвни клетки в 1 µl, т.е. в обем 4000 пъти по-голям, е необходимо да умножите броя на червените кръвни клетки, съдържащи се в един малък квадрат ^ по 4000.

Кръвта за преброяване на червените кръвни клетки се разрежда 200 пъти. За да разберете броя на червените кръвни клетки в цяла кръв, получената фракция се умножава по разреждането:

Този математически израз може да се преведе

представени под формата на фактори:

Дробният фактор се състои от постоянни величини. При преброяването им се получават 10 000 и целият израз приема следната форма: а -10 000 И така, броят на червените кръвни клетки в 1 μl кръв е равен на броя на червените кръвни клетки, преброени в пет големи квадрата на. Решетка на Горяев, умножена по 10 000.

Например: в 5 големи квадрата от решетката на Горяев са преброени 427 червени кръвни клетки. В 1 μl кръв броят на червените кръвни клетки ще бъде 427-10 000 = 4 270 000, или 4,27-106.

За да определите съдържанието на червени кръвни клетки в 1 литър кръв, трябва да умножите броя на червените кръвни клетки, изразен в милиони, по 10. В нашия пример броят на червените кръвни клетки в 1 литър кръв е 4,