Кровь человека под микроскопом. Микроскопия в разных областях применения

Признаки беременности после имплантации эмбриона

Важность науки в жизни всего общества отрицать очень сложно. Учёные и их разработки дали обществу всё то, чем оно теперь пользуется с радостью и наслаждается. Разработки учёных в разных областях позволяют побеждать смертельные болезни, бороться с психическими расстройствами, создавать уникальную «умную» технику и даже роботов. Возможности науки поистине безграничны. Новые лица всегда приносят с собой новые идеи, которые становятся основой для будущих разработок. Однако множество разработок базируется на простых и проверенных методах.

Мышей рандомизировали в группы. От трех до шести повторов собирали на экспериментальную группу. Сорт чистоты составлял 3% -7%. Для окрашивания внутриклеточных цитокинов клетки стимулировали в течение 5 часов с помощью фальбола ацетата миристата и иономицина в присутствии брефелдина А в течение последних 4 часов. Для окрашивания цитокинов клетки стимулировали в течение 4 часов с помощью фромбола миристатацетата и иономицина в присутствии брефелдина А в течение последних 2 часов.

Затем ячейки фиксировали и пермеабилизировали в соответствии с инструкциями производителя. Фиксация и окрашивание выполнялись в соответствии с инструкциями производителя. Все инъекции проводились в отсутствие анестезии и анальгезии, и мышей немедленно возвращали в домашние клетки в соответствии с процедурой. Ежегодно контролировалось благополучие экспериментальных животных. В ходе этих экспериментов не было отмечено никаких неожиданных нежелательных явлений.

Многие мудрецы прошлого говорили о том, что существует макро-, микромир. На том этапе развития люди не могли осознать всю глубину этих слов. Ведь макро- и микромир действительно существуют и очень тесно взаимодействуют. Крохотные изменения в структуре клетки могут быть вызваны глобальными изменениями в Солнечной системе. На сегодняшний день доказать или опровергнуть такую взаимосвязь очень сложно, но исследования мира бактерий и клеток говорят о том, что клетка - это маленькая Вселенная.

Иммунофлуоресцентное окрашивание и конфокальная микроскопия. Т. и замораживают в парах жидкого азота. Изображения были захвачены конфокальной микроскопией. Статистическую значимость оценивали с использованием теста Манна-Уитни. Сопряженные данные анализировали с использованием 2-хвостового парного теста Стьюдента. Эксперименты с муарой проводились в соответствии с соответствующим проектом Министерства внутренних дел и персональными лицензиями после институционального этического утверждения. Информированное согласие было получено от всех участников, и исследование было одобрено Национальным комитетом по этике исследований.

Микроскопия

Микроскопия - это научное при помощи микроскопа. В переводе с греческого это слово означает «маленький, небольшой». Микроскопия может подразделяться на несколько подвидов: оптическую, многофотонную, рентгеновскую, лазерную и электронную. Цель этого способа исследования заключается в увеличенном наблюдении за объектом и регистрацией замеченных изменений.

Конфликт интересов: авторы заявили, что конфликта интересов нет. Уровень глюкозы в крови жестко контролируется скоординированным действием по меньшей мере четырех типов клеток, составляющих островки поджелудочной железы. Более того, это исследование показало, что дельта-клетки специфически экспрессируют рецепторы, которые принимают и координируют системные сигналы от лептин, грелин и дофаминовых сигнальных путей, которые имплицируют их как интеграторов центральных и периферических метаболических сигналов в островок поджелудочной железы.

История микроскопа

В начале своего исторического развития микроскопы представляли собой которые использовали лучи видимого света. Такие приборы были очень слабы для наблюдения и подходили только для простейших операций. Идея возникновения электронного микроскопа возникла в тот момент, когда учёные задумались о замене электромагнитного излучения на электронный пучок. Это событие стало опорной точкой для развития электронного микроскопа, который значительно расширил возможности наблюдения за объектом.

Таким образом, это исследование идентифицирует основные особенности клеточного типа функции острого поджелудочной железы и обеспечивает критический ресурс для всестороннего понимания биологии островков и патогенеза диабета. Поджелудочные островки Лангерганса представляют собой кластеры по меньшей мере четырех различных типов эндокринных клеток, секретирующих гормоны, которые вызывают скоординированные, но отчетливые ответы для поддержания гомеостаза глюкозы. Таким образом, они занимают центральное место в патофизиологии диабета.

Методы микроскопии

Для того чтобы правильно и тщательно обследовать какой-либо объект, необходимо работать по определённому алгоритму. Подобные алгоритмы вырабатываются один раз и применяются годами. Для того чтобы изучать окружающий мир при помощи специальной техники, необходимо владеть особыми методами. Методы микроскопии - это совокупность различных алгоритмов, следуя которым, можно основательно и системно изучить конкретный объект микромира. Прохождение пучка света через микроскоп сопровождается некоторыми изменениями первоначальных характеристик, которые могут быть вызваны структурным строением предмета. Этот процесс может сопровождаться рядов оптических эффектов, таких как отражение, поглощение, преломление, дисперсия и т.д.

Состав особей человека не является ни однородным, ни статическим, но варьируется между индивидами и по регионам поджелудочной железы. Клеточная гетерогенность усложняет молекулярные исследования целых островков человека и может маскировать важную роль для менее распространенных клеток в популяции. Более того, это усложняет попытки идентифицировать эпигенетические и транскрипционные сигнатуры, отличающие диабетик от недиабетических островков, что приводит к непоследовательным сообщениям о влиянии генов и путей.

Обычные методы сортировки и обогащения неспособны конкретно очищать каждый тип клеток островков, поэтому точное понимание транскрипционного репертуара, определяющего идентичность и функцию каждого типа ячейки, отсутствует. Из этих профилей мы идентифицировали транскрипты, уникально важные для каждой личности и функции каждого типа островковых клеток. Данные и данные этого исследования являются важной основой для руководства будущим опросом на основе генома дисфункции островков и диабетом.

Методы световой микроскопии

Световая микроскопия - это система методов, которые используют различные оптические эффекты для достоверного отображения результатов. Видимые элементы и характер полученного изображения будут во многом зависеть от освещения. Всего насчитывается большое количество методов микроскопии: светлого поля, косого освещения, интерференционного контраста, тёмного поля, поляризационный метод, фазово-контрастная, ультрафиолетовая, люминесцентная, инфракрасная микроскопия, конфокальный микроскоп.

Янтарные одноячеистые транскриптомы точно повторяют те из интактных островков

Островки поджелудочной железы были получены от восьми доноров человеческих трупных органов. Транскриптомы сгруппированы донором, а не условием обработки или временем инкубации, что сильно указывает на то, что обработка островков существенно не изменила транскриптомы островков.

Одноклеточные транскриптомы отражают те парные интактные островки. Схема экспериментального рабочего процесса. Затем мы оценили степень, в которой остальные 978 одноцепочечных транскриптомов представляют собой образцы экспрессии, наблюдаемые в неповрежденных островках. Эти результаты показывают, что островковые одноклеточные транскриптомы являются высококачественными и эффективно отражают транскриптомы объемного островка.

Все эти методы имеют определённые достоинства и недостатки. При работе с образцом выбирать тот или иной метод следует исходя из его адекватности в данной ситуации. Сильные и слабые стороны каждого метода не важны в целом, главное, чтобы метод был применим в заданных условиях.

Микроскопия и медицина

Применение микроскопии в медицине имеет огромный потенциал. На сегодняшний день благодаря микроскопам можно исследовать различные клетки организма человека для того, чтобы точно определять состояние здоровья. Клетки организма дают наиболее точный и достоверный результат, который до недавнего времени было невозможно получить, так как микроскопы не могли дать исчерпывающей информации.

Однокамерное профилирование захватывает транскриптомы основных и мелких панкреатических эндокринных и экзокринных типов клеток. Поджелудочная железа также содержит три типа экзокринных клеток: ацинар, звездчатый и протонный, которые критически поддерживают переваривание путем синтеза и транспорта пищеварительных ферментов. Мы использовали эти маркерные гены для определения представления каждого типа клеток островков среди наших 978 профилированных отдельных клеток.

Таким образом, антитела против других потенциальных клеточных клеточных маркеров поверхности, которые мы идентифицировали, могут быть полезны для очистки других типов клеток островков. Одноэлементное профилирование идентифицирует неожиданное совпадение в выражении между малыми и основными типами островковых клеток. Методы сортировки и обогащения клеток, такие как сортировка клеток, активированных флуоресценцией, были использованы для идентификации характерных генов альфа и бета-клеток.

Использование таких приборов очень перспективно, ведь методы лечения и диагностики могут разительно преобразиться и вовсе перейти на новый уровень. Исследование с помощью микроскопов известно и применяется длительное время, однако наука стоит на пороге того, чтобы лечить человека клетками. Это уникальная возможность, которая позволит отойти от привычных методов лечения и забыть о лекарствах. Клетка - самый мощный элемент организма. Говорить о том, какую пользу может принести пересадка больному человеку здоровых клеток, просто бессмысленно, ведь это очевидно.

Гены, лежащие в основе метаболической функции, регуляции энергетического гомеостаза и сытости, специфичны для различных типов островковых клеток. Бета-клетки регулируют уровень глюкозы в крови через секрецию инсулина и, таким образом, чрезвычайно чувствительны к уровням глюкозы в крови.

Глюкозо-стимулированная секреция инсулина связана с универсальными основными путями клеточного метаболизма в бета-клетках. Конкретная экспрессия генов метаболического, сигнального и диабетического типов, специфичных для клеточного типа. Бета-клеточная экспрессия различных изоформ гликолитических и метаболических промежуточных челноков.

Исследование мочи

Общий анализ мочи - это комплекс мероприятий, которые направлены на исследование свойств мочи и её физико-химического состава. Важными показателями при этом являются цвет, запах, реакция, прозрачность, плотность, а также содержание в моче различных веществ. Микроскопия осадка мочи позволяет определить наличие солей, клеточных элементов и цилиндров. Следует понимать, что моча - это конечный продукт деятельности почек, который может очень точно отображать состояние обменных процессов и крови в организме.

Таким образом, наши данные предполагают интригующие роли дельта-клеток островков в интеграции метаболических сигналов с помощью сигнальных путей лептина, грелина и допамина. Одноклеточные транскриптомы связывают редкие и распространенные гены генетического риска диабета с типами островковых клеток. Мы также исследовали образцы экспрессии клеток типа 536 генов, определяющих количественные признаки локусов. Сто пятьдесят девять дополнительных генов не проявили больше или равно четырехкратному изменению экспрессии в любом типе клеток эндокринных островков.

Анализ осадка мочи

Микроскопия мочи позволяет создать более полную картину при полном обследовании организма. Также мазок часто используют для обычной и дифференциальной диагностики болезней мочевыводящих путей и почек. Во время лечения микроскопию мочи могут назначать для того, чтобы получить оценку эффективности докторского вмешательства. Исследование мочи позволяет выявить конкретные или потенциальные проблемы в водно-электролитном балансе организма, также в процессе обмена веществ. Анализ мочи весьма эффективен при диагностике на болезни желудочно-кишечного тракта, а также при инфекционных и воспалительных процессах в организме. Иногда микроскопию мочи используются для того, чтобы следить за состоянием пациента в период терапевтического или хирургического лечения.

Недавние исследования показали особенности де-дифференцировки бета-клеток в условиях диабетогена и стресса. Недавние исследования на островке с одной ячейкой возникли, когда исследование изучалось. Показатели валидации для дельта-клеток были заметно ниже, вероятно, из-за относительно небольшого количества клеток, профилированных для сравнения. Кроме того, эти подходы затрудняют обнаружение экспрессии и изменений в экспрессии транскриптов с низким содержанием. Несмотря на эти ограничения, мы наблюдали сильную корреляцию между транскриптами парных объемных островков и отдельных клеток, что свидетельствует о том, что они представляют собой высококачественные и репрезентативные наборы данных.

Исследование крови под микроскопом

Кровяные тельца формируются в красном костном мозге, а затем выбрасываются в кровоток. Каждая выполняет свою определённую функцию. Лейкоциты нужны для борьбы с инфекционными клетками, эритроциты способствуют обогащению клеток кислородов и удалению из них углекислого газа, тромбоциты очень важны для гемостаза. В нормальных условиях тело человека вырабатывает нормативное значение всех клеток, которое не выходит за определённые рамки. При возникновении каких-либо осложнений или при болезни клетки крови могут менять свои размеры, форму, цвет и количество. Только благодаря точному микроскопическому исследованию можно определить состояние клеток и сделать соответствующие выводы.

Основываясь на профилях транскриптомов с одной клеткой, мы идентифицировали клетки каждого эндокринного и экзокринного типа в поджелудочной железе агностиком и управляли данными. Этот подход определил сигнатуры выражений каждого типа ячеек с точностью до одной ячейки. Эти данные свидетельствуют о дисфункции дельта-клеток, в дополнение к дисфункции бета-клеток, в качестве потенциальных факторов, способствующих развитию моногенных диабетических расстройств.

Это явно требует дополнительной работы, чтобы лучше понять регуляцию и функцию этих клеток в нормальных и диабетических состояниях. Новые маркеры клеточной поверхности, идентифицированные для каждого из этих типов клеток, могут использоваться для специфического обогащения и очистки этих популяций для детального функционального анализа.

Кровь - это живительная жидкость организма, которая обеспечивает обмен полезными веществами между всеми клетками. Микроскопия мазка крови - это исследование, которое производится под микроскопом. Исследуется препарат, приготовленный из одной капли крови. Эта процедура входит в общий анализ крови или лейкоцитарную формулу и отдельно не совершается.

Получение, обработка и диссоциация островков

Это различие было не столь выраженным, как в предыдущих отчетах, возможно, из-за относительно скромного количества клеток, отобранных для каждого человека. Через двадцать четыре часа после переноса приблизительно 500 эквивалентов островков аликвотировали и центрифугировали при 180 г в течение 3 мин при комнатной температуре. Общее время обработки и обработки для каждого островка составляло ≤60 мин. Для каждого препарата на островка использовалось до двух микрожидкостных микросхем.

Последовательность, считывание картографирования и контроль качества

Обработка с использованием одной ячейки и фильтрация качества

Классификация типов островков. Из многих аспектов альтернативной медицины одним из самых причудливых является анализ клеток живой крови. Этот несанкционированный анализ крови, возможно, указывает на недостатки питания и другие туманные состояния.

Микроскопия мазка

Для чего нужен мазок крови? Микроскопия мазка крови даёт специалисту очень важные знания о состоянии здоровья человека. При помощи этого анализа можно определить количественное соотношение эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, а также их формы и размер. Кроме того, позволяет определять количественное выражение незрелых лейкоцитов, что является очень важным моментом в ряде заболеваний. Также мазок крови позволяет качественно диагностировать заболевания, которые могут быть связаны с нарушениями функций крови, её образования, свёртываемостью, а также разрушением Очень важной задачей микроскопического мазка на кровь является регулярное отслеживание состояния клеток крови, их зрелость после лучевой и химиотерапии, при проблемах с гемоглобином, а также при лейкозах.

Возьмите простой научный факт или термин, постройте сложную фантазию поверх нее, продвиньте ее, и у вас будет псевдонаука. Примером может служить анализ живой крови с помощью темной микроскопии. Это звучит как законная и ценная основанная на доказательствах диагностическая процедура; это не.

Микроскопия в темном поле - это микроскопический метод, при котором свет ударяет по наблюдаемому материалу со стороны, а не из-под и через материал. Фон темный, с наблюдаемым материалом, выделенным боковым источником света. В обычной яркой микроскопии фон является белым или очень легким, и материал обычно окрашивается в темный цвет, чтобы получить мелкие детали и цвета, которые обычно не видны.

Назначается мазок на кровь в том случае, если общий анализ крови показал, что увеличено количественное выражение лейкоцитов, незрелых или атипичных клеток. Для мазка можно использовать биоматериал из крови или капилляров.

Биология и микроскопы

Биология значительно расширяет возможности использования микроскопов. Как уже говорилось раньше, цитология во многом опирается на современные и мощные микроскопы. Микроскопия в биологии открывает для учёных невиданные просторы для опытов и исследований. Современные разработки позволяют уже сейчас говорить о том, какое будущее нас ждёт.

В медицине наиболее распространенное использование яркой микроскопии в диагностических целях. Общепринятый полный анализ крови часто частично выполняется с окрашенными мазками крови пациента, наблюдаемыми при яркой микроскопии. С помощью этой методики ученый из клинической лаборатории может наблюдать очень мелкие детали о размере и форме эритроцитов; форма, размер и относительное количество лейкоцитов; и наличие или отсутствие тромбоцитов, те мелкие клеточные фрагменты, которые вызывают сгущение крови.

Микроскопия в полевых условиях полезна в медицинской лаборатории для идентификации живых спирохет, собранных у инфицированного пациента. Это бактерии, похожие на штопоры, которые можно увидеть, шевелясь и пробивая их через жидкость или материал, в котором они подвешены. Поскольку темное поле по определению темное, большинство деталей, которые очевидны при ярком исследовании, невидимы. Использование темных методов при исследовании живой крови на клеточную форму и детализацию является подозрительным и не предлагается большинством авторитетных медицинских лабораторий, поскольку оно имеет мало диагностической ценности.

Микроскопия в биологии имеет очень широкое применение. Приборы позволяют исследовать организмы, которые недоступны глазу человека, но очень важны для научных экспериментов. В биологии чаще всего используют метод электронной микроскопии, который даёт изображение за счёт направленного потока электронов. При этом даже световой микроскоп позволяет исследовать живые биологические объекты.

Метод микроскопии в биологии применяется очень активно, так как практически все разновидности применимы для биологических исследований. Интерференционная микроскопия позволяет исследовать прозрачные жидкости и объекты, а также давать их Это возможно благодаря тому, что луч света, проходя через прибор, раздваивается: одна его часть проходит через объект, а другая - мимо. Таким образом, два луча интерферируют и соединяются, давая полноценное изображение.

Микроскопия в разных областях применения

Область применения микроскопии очень широка. Несмотря на то что изначально микроскопы были предназначены для исследований в области биологии, на сегодняшний день сфера их влияния значительно расширилась. Микроскопия - это комплекс методов, который нашёл своё применение при анализе твёрдых и кристаллических тел, структуре и строений поверхностей. Также микроскопы активно используются в медицине не только для диагностики, но и при выполнении микрохирургических операций. Более того, известно, что учёными был разработан подводный лазерный микроскоп, цель которого состоит в поиске внеземной жизни на Европе.

Также не следует забывать о бурном развитии нанотехнологий, которые немыслимы без микроскопов. Развитие этой отрасли приводит к тому, что разновидности микроприборов постоянно совершенствуются. Более того, появляются новые которые предназначены для исследования определённой среды.

Подводя некоторые итоги, следует сказать о том, что микроскопия - это перспективная область, которая с каждым годом развивается всё более активно. Интерес к стволовым клеткам человека, а также развитие нанотехнологий ведёт к тому, что микроскопы становятся неотъемлемой частью любой исследовательской работы.

Общий клинический анализ крови – это самый распространенный диагностический тест, который назначает пациенту врач. За последние десятилетия технология этого рутинного, но очень информативного исследования проделала колоссальный рывок – она стала автоматической. В помощь врачу лабораторной диагностики, орудием труда которого был обычный световой микроскоп, пришли высокотехнологичные автоматические гематологические анализаторы.

В этом посте мы расскажем, что именно происходит внутри «умной машины», видящей нашу кровь насквозь, и почему ей следует верить. Мы будем рассматривать физику процессов на примере гематологического анализатора UniCel DxH800 мирового бренда Beckman Coulter. Именно на этом оборудовании выполняются исследования, заказанные в сервисе лабораторной диагностики LAB4U.RU . Но для того, чтобы понять технологию автоматического анализа крови, мы разберемся с тем, что видели врачи-лаборанты под микроскопом и как они интерпретировали эту информацию.

Параметры анализа крови

Итак, в крови содержится три вида клеток:
  • лейкоциты, обеспечивающие иммунную защиту;
  • тромбоциты, отвечающие за свертываемость крови;
  • эритроциты, осуществляющие транспорт кислорода и углекислого газа.
Эти клетки находятся в крови в совершенно определенных количествах. Их обуславливают возраст человека и состояние его здоровья. В зависимости от условий, в которых находится организм, костный мозг производит столько клеток, сколько их требуется организму. Поэтому, зная количество определенного вида клеток крови и их форму, размер и другие качественные характеристики, можно уверенно судить о состоянии и текущих потребностях организма. Именно эти ключевые параметры – количество клеток каждого вида, их внешний вид и качественные характеристики – составляют общий клинический анализ крови.


При проведении общего анализа крови производят подсчет количества эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов. С лейкоцитами сложнее: их несколько видов, и каждый вид выполняет свою функцию. Выделяют 5 разных видов лейкоцитов:
  1. нейтрофилы, нейтрализующие в основном бактерии;
  2. эозинофилы, нейтрализующие иммунные комплексы антиген-антитело;
  3. базофилы, участвующие в аллергических реакциях;
  4. моноциты – главные макрофаги и утилизаторы;
  5. лимфоциты, обеспечивающие общий и местный иммунитет.
В свою очередь, нейтрофилы по степени зрелости разделяют на:
  • палочкоядерные,
  • сегментоядерные,
  • миелоциты,
  • метамиелоциты.
Процент каждого вида лейкоцитов в их общем объеме называют лейкоцитарной формулой, которая имеет важное диагностическое значение. Например, чем более выражен бактериальный воспалительный процесс, тем больше нейтрофилов в лейкоцитарной формуле. Наличие нейтрофилов разной степени зрелости говорит о тяжести бактериальной инфекции. Чем острее процесс, тем больше в крови палочкоядерных нейтрофилов. Появление в крови метамиелоцитов и миелоцитов говорит о крайне тяжелой бактериальной инфекции. Для вирусных заболеваний характерно увеличение лимфоцитов, при аллергических реакциях – увеличение эозинофиллов.

Помимо количественных показателей, крайне важна морфология клеток. Изменение их обычной формы и размеров также свидетельствует о наличии определенных патологических процессов в организме.

Важный и наиболее известный показатель – количество в крови гемоглобина – сложного белка, обеспечивающего поступление кислорода к тканям и выведение углекислого газа. Концентрация гемоглобина в крови – главный показатель при диагностике анемий.

Еще один из важных параметров – это скорость оседания эритроцитов (СОЭ). При воспалительных процессах у эритроцитов появляется свойство слипаться друг с другом, образуя небольшие сгустки. Обладая большей массой, слипшиеся эритроциты под действием силы тяжести оседают быстрее, чем одиночные клетки. Изменение скорости их оседания в мм/ч является простым индикатором воспалительных процессов в организме.

Как было: скарификатор, пробирки и микроскоп

Забор крови



Вспомним, как раньше сдавали кровь: болезненный прокол подушечки скарификатором, бесконечные стеклянные трубочки, в которые собирали драгоценные капли выжатой крови. Как лаборант одним стёклышком проводил по другому, где находилась капля крови, царапая на стекле номер простым карандашом. И бесконечные пробирки с разными жидкостями. Сейчас это уже кажется какой-то алхимией.

Кровь брали именно из безымянного пальца, на что были вполне серьезные причины: анатомия этого пальца такова, что его травмирование дает минимальную угрозу сепсиса в случае инфицирования ранки. Забор крови из вены считался куда более опасным. Поэтому анализ венозной крови не был рутинным, а назначался по необходимости, и в основном в стационарах.

Стоит отметить, что уже на этапе забора начинались значительные погрешности. Например, разная толщина кожи дает разную глубину укола, вместе с кровью в пробирку попадала тканевая жидкость – отсюда изменение концентрации крови, кроме того, при давлении на палец клетки крови могли разрушаться.

Помните ряд пробирок, куда помещали собранную из пальца кровь? Для подсчета разных клеток действительно нужны были разные пробирки. Для эритроцитов – с физраствором, для лейкоцитов – с раствором уксусной кислоты, где эритроциты растворялись, для определения гемоглобина – с раствором соляной кислоты. Отдельный капилляр был для определения СОЭ. И на последнем этапе делался мазок на стекле для последующего подсчета лейкоцитарной формулы.

Анализ крови под микроскопом

Для подсчета клеток под микроскопом в лабораторной практике использовался специальный оптический прибор, предложенный еще в ХIX веке русским врачом, именем которого этот прибор и был назван – камера Горяева. Она позволяла определить количество клеток в заданном микрообъеме жидкости и представляла собой толстое предметное стекло с прямоугольным углублением (камерой). На нее была нанесена микроскопическая сетка. Сверху камера Горяева накрывалась тонким покровным стеклом.

Эта сетка состояла из 225 больших квадратов, 25 из которых были разделены на 16 малых квадратов. Эритроциты считались в маленьких исчерченных квадратах, расположенных по диагонали камеры Горяева. Причем существовало определенное правило подсчета клеток, которые лежат на границе квадрата. Расчет числа эритроцитов в литре крови осуществлялся по формуле, исходя из разведения крови и количества квадратов в сетке. После математических сокращений достаточно было посчитанное количество клеток в камере умножить на 10 в 12-й степени и внести в бланк анализа.

Лейкоциты считали здесь же, но использовали уже большие квадраты сетки, поскольку лейкоциты в тысячу раз больше, чем эритроциты. После подсчета лейкоцитов их количество умножали на 10 в 9-й степени и вносили в бланк. У опытного лаборанта подсчет клеток занимал в среднем 3-5 мин.

Методы подсчета тромбоцитов в камере Горяева были очень трудоемки из-за малой величины этого вида клеток. Оценивать их количество приходилось только на основе окрашенного мазка крови, и сам процесс был тоже весьма трудоемким. Поэтому, как правило, количество тромбоцитов рассчитывали только по специальному запросу врача.

Лейкоцитарную формулу , то есть процентный состав лейкоцитов каждого вида в общем их количестве мог определять только врач – по результатам изучения мазков крови на стеклах.



Визуально определяя находящиеся в поле зрения различные виды лейкоцитов по форме их ядра, врач считал клетки каждого вида и общее их количество. Насчитав 100 в совокупности, он получал требуемое процентное соотношение каждого вида клеток. Для упрощения подсчета использовались специальные счетчики с отдельными клавишами для каждого вида клеток.

Примечательно, что такой важный параметр, как гемоглобин, определялся лаборантом визуально (!) по цвету гемолизированной крови в пробирке с соляной кислотой. Метод был основан на превращении гемоглобина в солянокислый гематин коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Полученный раствор солянокислого гематина разводили водой до цвета стандарта, соответствующего известной концентрации гемоглобина. В общем, прошлый век

Как стало: вакуумные контейнеры и гематологические анализаторы

Начнем с того, что сейчас полностью поменялась технология забора крови. На смену скарификаторам и стеклянным капиллярам с пробирками пришли вакуумные контейнеры. Использующиеся теперь системы забора крови малотравматичны, процесс полностью унифицирован, что значительно сократило процент погрешностей на этом этапе. Вакуумные пробирки, содержащие консерванты и антикоагулянты, позволяют сохранять и транспортировать кровь от точки забора до лаборатории. Именно благодаря появлению новой технологии стало возможным сдавать анализы максимально удобно – в любое время, в любом месте.



На первый взгляд, автоматизировать такой сложный процесс, как идентификация клеток крови и их подсчет, кажется невозможно. Но, как обычно, все гениальное просто. В основе автоматического анализа крови лежат фундаментальные физические законы. Технология автоматического подсчета клеток была запатентована в далеком 1953 году американцами Джозефом и Уолессом Культерами. Именно их имя стоит в название мирового бренда гематологического оборудования Bеckman&Coulter.

Подсчет клеток

Апертурно-импедансный метод (метод Культера или кондуктометрический метод) основан на подсчете количества и оценке характера импульсов, возникающих при прохождении клетки через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два электрода. При прохождении клетки через канал, заполненный электролитом, возрастает сопротивление электрическому току. Каждое прохождение клетки сопровождается появлением электрического импульса. Чтобы выяснить, какова концентрация клеток, необходимо пропустить через канал определенный объем пробы и сосчитать количество появившихся импульсов. Единственное ограничение – концентрация пробы должна обеспечивать прохождение через апертуру только одной клетки в каждый момент времени.



За прошедшие более 60 лет технология автоматического гематологического анализа прошла большой путь. Вначале это были простые счетчики клеток, определяющие 8-10 параметров: количество эритроцитов (RBC), количество лейкоцитов (WBC), гемоглобин (Hb) и несколько расчетных. Такими были анализаторы первого класса .

Второй класс анализаторов определял уже до 20 различных параметров крови. Они существенно выше по уровню в дифференциации лейкоцитов и способны выделять популяции гранулоцитов (эозинофилы + нейтрофилы + базофилы), лимфоцитов и интегральной популяции средних клеток, куда относились моноциты, эозинофилы, базофилы и плазматические клетки. Такая дифференциация лейкоцитов успешно использовалась при обследовании практически здоровых людей.

Самыми технологичными и инновационными анализаторами на сегодняшний день являются машины третьего класса , определяющие до сотни различных параметров, проводящие развернутое дифференцирование клеток, в том числе по степени зрелости, анализирующие их морфологию и сигнализирующие врачу-лаборанту об обнаружении патологии. Машины третьего класса, как правило, снабжены еще и автоматическими системами приготовления мазков (включая их окраску) и вывода изображения на экран монитора. К таким передовым гематологическим системам относятся оборудование BeckmanCoulter, в частности система клеточного анализа UniCel DxH 800 .



Современные аппараты BeckmanCoulter используют метод многопараметрической проточной цитометрии на основе запатентованной технологии VCS (Volume-Conductivity-Scatter). VCS-технология подразумевает оценку объема клетки, ее электропроводимость и светорассеяние.

Первый параметр – объем клетки – измеряется с использованием принципа Культера на основе оценки сопротивления при прохождении клеткой апертуры при постоянном токе. Величину и плотность клеточного ядра, а также ее внутренний состав определяют с помощью измерения ее электропроводности в переменном токе высокой частоты. Рассеяние лазерного света под разными углами позволяет получить информацию о структуре клеточной поверхности, гранулярности цитоплазмы и морфологии ядра клетки.

Полученные по трем каналам данные комбинируются и анализируются. В результате клетки распределяются по кластерам, включая разделение по степени зрелости эритроцитов и лейкоцитов (нейтрофилов). На основе полученных измерений этих трех размерностей определяется множество гематологических параметров – до 30 в диагностических целях, более 20 в исследовательских целях и более ста специфичных расчетных параметров для узкоспециализированных цитологических исследований. Данные визуализируются в 2D- и 3D-форматах. Врач-лаборант, работающий с гематологическим анализатором BackmanCoulter, видит результаты анализа на мониторе примерно в таком виде:



А далее принимает решение – надо ли их верифицировать или нет.

Стоит ли говорить, что информативность и точность современного автоматического анализа во много раз выше мануального? Производительность машин подобного класса – порядка сотни образцов в час при анализе тысяч клеток в образце. Вспомним, что при микроскопии мазка врачом анализировалось только 100 клеток!

Однако несмотря на эти впечатляющие результаты, именно микроскопия до сих пор пока остается «золотым стандартом» диагностики. В частности, при выявлении аппаратом патологической морфологии клеток образец анализируется под микроскопом вручную. При обследовании больных с гематологическими заболеваниями микроскопия окрашенного мазка крови проводится только вручную опытным врачом-гематологом. Именно так, вручную, дополнительно к автоматическому подсчету клеток, выполняется оценка лейкоцитарной формулы во всех детских анализах крови по заказам, сделанным с помощью лабораторного онлайн-сервиса LAB4U.RU.

Вместо резюме

Технологии автоматизированного гематологического анализа продолжают активно развиваться. По существу они уже заменили микроскопию при выполнении рутинных профилактических анализов, оставив ее для особо значимых ситуаций. Мы имеем в виду детские анализы, анализы людей, имеющих подтвержденные заболевания, особенно гематологические. Однако в обозримом будущем и на этом участке лабораторной диагностики врачи получат аппараты, способные самостоятельно выполнять морфологический анализ клеток с использованием нейронных сетей. Снизив нагрузку на врачей, они в то же время повысят требования к их квалификации, поскольку в зоне принятия решений человеком останутся только нетипичные и патологические состояния клеток.

Количество информативных параметров анализа крови, увеличившиеся многократно, поднимает требования к профессиональной квалификации и врача-клинициста, которому необходимо анализировать сочетания значений массы параметров в диагностических целях. На помощь врачам этого фронта идут экспертные системы, которые, используя данные анализатора, предоставляют рекомендации по дальнейшему обследованию пациента и выдают возможный диагноз. Такие системы уже представлены на лабораторном рынке. Но это уже тема отдельной статьи.

Метки: Добавить метки

Публикации по теме