Преброяване на левкоцитите в камерата по формула на Горяева. Изтеглете книгата "Клинични лабораторни изследвания" (2.84Mb)

Броят на левкоцитите в камерата на Горяев е един от начините за определяне на броя им в кръвта на пациента. Броят на левкоцитите зависи от много фактори, които включват скоростта на образуване, изолиране от костния мозък и разрушаване. Всички тези процеси са пряко повлияни от физиологични фактори. Следователно, постоянна промяна в броя на левкоцитите в здрав човеквъзможен. Това е особено очевидно при сравняване на резултатите от сутрешните и вечерните анализи.

Метод за преброяване на левкоцитите в камерата на Горяев

Този тръбен метод се състои от следните стъпки:

1. Епруветката се напълва с 0,4 ml оцетна киселина с тиазиново багрило. С помощта на капилярна пипета се вземат 20 µl прясна кръв и се издухват в същата епруветка. Получената смес се разбърква старателно.
2. Тънка стъклена плоча в камерата се избърсва старателно, след което се образуват ирисцентни петна.
3. След това се взема капка от получения разтвор от кръвта с оцетна киселина и се довежда до ръба на чинията.
4. Когато камерата се напълни, тя се оставя необезпокоявана за една минута, така че белите кръвни клетки да започнат да се утаяват.
5. При малко увеличение се броят левкоцитите.

За да получите правилни резултати, се използва специална формула за изчисляване на броя на левкоцитите в 1 µl кръв. Нормата е индикатор от 4 до 9 на 10 литра.

Ако се получи резултат, надвишаващ тази марка, тогава пациентът се диагностицира с левкоцитоза. Ако има намаление - левкопения. Но това е на теория, всъщност трябва да разгледате други показатели, за да определите точно заболяването.

За преброяване на левкоцитите се използват три вида формули:

• За 64 празни квадратчета

N = m x 4000 x 20/(64 x 16) = m x 78,13 ≈ m x 78

• За 169 празни квадрата

N = m x 4000 x 20 / (169 x 16) ≈ m x 29,6

• За 100 празни квадратчета

N = m x 4000 x 20 / (100 x 16) ≈ m x 50.

Камерата Goryaev е устройство, което може най-точно да преброи броя на левкоцитите, както и други подобни частици. Състои се от специално дебело стъкло с правоъгълна камера. Съдържа микроскопична решетка и тънко оптично стъкло.

Това устройство е разработено от известния професор Горяев Николай Константинович, който е работил в Казанския университет. Неговата специфична решетка дава най-точни резултати от камерите на други известни учени.

Що се отнася до поддръжката на камерата, тук също има някои нюанси. По време на почивките в работата камерата Goryaev трябва да бъде на сухо място. Когато работата е завършена, тя трябва да бъде обработена. За целта апаратът се потапя в етанол(70%) за половин час. Друг вариант за почистване е разтвор на формалин (4%) за един час. Последната стъпка е изплакване на камерата Goryaev с дестилирана вода и избърсване с мека кърпа.

Има случаи, когато при ниски темпове в тялото на пациента всичко е наред. Това предполага, че основният резерв от левкоцити се намира в тъканите. При такива хора предразположеността към различни заболявания е много ниска, така че те рядко се разболяват. По принцип това е наследственост.

Левкопения и левкоцитоза

Възможно е също така да се предположи, че пациентът има диагноза левкопения с помощта на камерата Goryaev. Дели се на органичен и функционален.

Функционалните отклонения включват:

• заболявания на вирусна или бактериална етиология (чревни инфекции, хепатит А и др.);
• реакция към определени лекарства;
• със силно натоварване на мускулите, стрес, диета;
• с неправилно съхранение на кръв.

Органичните причини включват:

• панмиелофтиза;
• левкемия;
• болест на Ходжкин;
• ревматично заболяване;
• йонно облъчване;
• агранулоцитоза.

Тялото реагира с левкоцитоза, когато ендогенни и екзогенни фактори му влияят. На практика се разграничават физиологични и патологични форми на заболявания.

БРОИТЕЛНИ КАМЕРИ- устройства за преброяване на формените елементи на кръвта, урината и гръбначно-мозъчна течносткакто и микроорганизми. Предлага се на К. с. Френски физиолог L. Ch. Malassez през 1874 г

К. с. представляват дебело предметно стъкло с вдлъбнатина, на дъното на която е гравирана решетка за броене; върху вдлъбнатината е поставено полирано покривно стъкло. Постоянна височина К. с. се осигурява чрез плътно триене на покритието и плъзгачите до образуването на дъгови Нютонови пръстени (интерферентни ленти).

Структурните елементи на всички видове решетки са големи и малки квадрати. Решетки различни видове- Томас, Бъркер, Предтеченски, Тюрк, Нойбауер, Горяев, Фукс - Розентал и др. - се отличават с различно групиране на големи и малки квадрати.

Известни стойности - височината на камерата, площта на решетката и нейните разделения и разреждането на кръвта, взета за изследване - ви позволяват да изчислите броя на формираните елементи в определен обем (1 μl ) кръв (или друга среда).

Има отворени и затворени To. AT затворена камерапокривното стъкло се втрива след пълнене и в него могат да попаднат въздушни мехурчета. Такива К. с. (Thomas - Zeiss с мрежа Tom, Dunger със специална мрежа) са неудобни за използване и не се използват.

Отворените камери (фиг. 1) се пълнят след припокриване на покривното стъкло. Имат две решетки на един слайд. Плочите с гравирани решетки са разделени с жлебове една от друга, както и от останалата част на предметното стъкло. Наличието на жлебове позволява да се регулира пълненето на камерите. Някои камери са оборудвани с метални скоби, които държат покривното стъкло на място.

Отворен за. е описан за първи път от S. P. Alferov през 1883 г., след това през 1905 г. от K. Burker. Известни са откритите преброителни камери на Ключарев, Гаусер и Леви, Гелбер, Глауберман. В СССР широко се използват камерите за броене на Горяев и Фукс-Розентал. Камерата на Горяев с мрежата на Горяев (фиг. 2) има обем 0,9 μl, площта на мрежата е 9 mm 2 . Мрежата се състои от 225 големи квадрата; 100 от тях са празни, 25 са разделени на 16 малки квадрата, 100 са разделени с ивици.

Камерата за броене на Fuchs-Rosenthal с мрежата на Fuchs-Rosenthal (фиг. 3) има обем от 3,2 μl, площ на решетката от 16 mm 2 и се състои от 256 големи квадрата (квадратите, разделени от ивици, не се броят).

Метод на работа

Преди работа стъклото се плъзга към. и смляното покривно стъкло се измиват под течаща вода вода от чешматаи избършете на сухо. След това покривното стъкло се търка плътно в камерата (докато се появят нютоновите пръстени на дъгата, тъй като само при това условие обемът на K. s. е постоянен).

Преди да напълните камерата, съдържанието на епруветката се разбърква няколко пъти, след това се взема капка кръв от епруветката с разтопения край на стъклената пръчка, накланя се и се нанася върху предметно стъкло в самия ръб на покривното стъкло. Ако една капка кръв не е достатъчна за пълно запълване на К. с., добавете още една капка. Ако кръвта се вземе в миксера, тогава първите капки се отделят от капиляра на миксера и K. s. напълнете с капка от ампулата на миксера. Останалата течност от предметното стъкло се отстранява с марлен тампон. Броенето започва след 3 минути. след напълване на камерата (през това време кръвните клетки се утаяват) под микроскоп при слабо увеличение (обектив X 8, окуляр X 10 или X 15) и затъмнено зрително поле (с покрита диафрагма или с леко спуснат кондензатор). На преброяване подлежат клетките, разположени вътре в квадрата (фиг. 4). Клетките, пресечени от страните на квадратите, се броят по следния начин: ако повече от половината клетка е вътре в квадрата, тогава се брои; ако е извън него, не се брои. Клетки, пресечени с линии точно по средата, се броят на две съседни, дясна и горна, линии от квадрати и не се броят на другите две. Когато се използват подходящи разтвори за разреждане, еритроцитите, левкоцитите, тромбоцитите, еозинофилите, базофилите и ретикулоцитите могат да бъдат преброени в камерата на Goryaev.

Еритроцитите се преброяват в 80 малки квадрата, тоест в 5 големи квадрата, разположени диагонално. Изчислението се извършва по формулата:

X = a*4000*200/80,

където a е броят на еритроцитите, преброени в 80 малки квадратчета, 80 е броят на преброените малки квадратчета, 200 е степента на разреждане на кръвта, 4000 е множителят за получаване на съдържанието на еритроцити в 1 μl кръв (обемът на малък квадрат е 1/4000 μl). На практика броят на червените кръвни клетки, преброени в 5 големи квадрата, се умножава по 10 000.

Левкоцитите се преброяват в 1600 малки квадрата (в 100 големи квадрата). Изчислението се извършва по формулата:

X = a * 4000 * 20 / 1600,

където a е броят на левкоцитите, преброени в 1600 малки квадратчета, 1600 е броят на преброените малки квадратчета, 20 е степента на разреждане на кръвта, 4000 е множител за получаване на съдържанието на левкоцити в 1 μl кръв. На практика броят на левкоцитите, преброени в 1600 малки квадрата, се умножава по 50.

Тромбоцитите се преброяват в 400 малки квадрата (25 големи квадрата по диагонала на решетката). Реагентите за разреждане могат да бъдат изотоничен разтвор на натриев хлорид, различни решения, запазвайки тромбоцитите и хемолизирайки еритроцитите.

Тромбоцитите се преброяват под конвенционален микроскоп и с помощта на фазово-контрастно устройство (вижте Фазово-контрастна микроскопия), за да се идентифицират по-ясно. След разреждане епруветката с кръв се оставя за 25-30 минути. за хемолиза на еритроцитите. След това съдържанието на епруветката се смесва отново и се напълва с K. с., to-ruyu се поставя за 5 минути. във влажна камера (напр. панички на Петри с мокра памучна вата) за утаяване на тромбоцитите. Изчислението се извършва по формулата:

X = a*4000*200/400,

където a е броят на тромбоцитите, преброени в 400 малки квадратчета, 200 е степента на разреждане на кръвта, 400 е броят на преброените малки квадратчета, 4000 е множител за получаване на броя на тромбоцитите в 1 μl кръв. На практика броят на тромбоцитите, преброени в 400 малки квадрата, се умножава по 2000.

Броят на базофилите и еозинофилите се преброява в камерата на Горяев в 1600 малки квадратчета, както и левкоцитите. Практически изчисленият брой базофили и еозинофили се умножава по 50.

Ретикулоцитите се преброяват в камерата на Горяев в 80 малки квадратчета, като еритроцитите. Практически преброеният брой ретикулоцити се умножава по 10 000.

Определянето на общия брой клетки в цереброспиналната течност (виж) се извършва най-добре в камерата на Fuchs-Rosenthal (поради малкия брой левкоцити в цереброспиналната течност). Пребройте цялата мрежа (256 големи квадрата) под микроскоп с ниско увеличение (окуляр x 15, обектив x 8).

При много в големи количестваклетки, половината от решетката се допуска да се преброи (с последващо умножение на резултата по 2). Изчислението се извършва по формулата:

X \u003d a * 11 / 3,2 * 10,

където a е броят на клетките, преброени в 256 квадрата, 11/10 е степента на разреждане, 3,2 е обемът на камерата в µl. На практика при броене в камерата на Фукс-Розентал броят на левкоцитите се разделя на 3.

В камерата на Горяев клетките на гръбначно-мозъчната течност се преброяват най-малко 3 пъти (също и цялата площ), като всеки път камерата се запълва отново, след което се взема средното аритметично. Изчислението се извършва по формулата:

X \u003d a * 11 / 0,9 * 10,

където a е средноаритметичният брой клетки, преброени върху цялата мрежа, 11/10 е степента на разреждане, 0,9 е обемът на камерата в μl. На практика броят на преброените левкоцити се умножава по 1,2.

Количественото определяне на образуваните елементи в урината се извършва в камерите на Фукс-Розентал, Горяев: броене на еритроцити и левкоцити при средно увеличение на микроскопа, броене на цилиндри при ниско. Степента на разреждане на урината зависи от метода на изследване (виж Урина).

Преброяване в K. s. не съвсем точно. Грешката на метода е от 10 до 20% в зависимост от броя на преброените елементи.

Условия за грижа и съхранение

Предпазвайте камерите от мръсотия и прах върху решетката. След работа камерата и покривното стъкло се измиват под течаща вода и внимателно, но старателно се избърсват с чиста кърпа (може и марля). След това го увийте в хартия и го поставете в кутия.

Библиография:Ръководство за клинични лабораторни методи за изследване, изд. Е. А. Кост, стр. 22, М., 1975.

Д. Н. Ишмухаметов

мл. Във vidalevsky епруветки с пипета

При добавяне на 0,02 ml кръв към 0,4 ml оцетна киселина се получава разреждане 20 пъти, което е необходимо за преброяване на левкоцитите.

За да се преброят формираните елементи, разредената кръв се поставя в камера за броене, в която клетките са подредени в един слой. Познавайки обема на камерата и разреждането на кръвта, изчислете броя на формираните елементи в 1 литър кръв.

Устройството на камерата и решетката Goryaev. Камерата на Goryaev (фиг. 37) е дебело стъкло, изрязано с четири напречни канала. Браздите разделят стъклото на плочи - две странични и средна. Средната пластина е с 0,1 мм по-ниска от страничните. Разделен е с напречна бразда на 2 равни части. На всяка половина на средната плоча е нанесена решетка на Горяев.

Аксесоарът на камерата е защитно стъкло. Трябва да се нанесе така, че да покрива както страничните, така и средните плочи. Чрез натискане на ръбовете на стъклото с палци, то се търка в страничните плочи, докато се появят преливащи се пръстени (пръстени на Нютон).

Тъй като страничните плочи са по-високи от средните, остава празнина между тях и покривното стъкло. Това е камерата, в ЩШ

пълни с разредена кръв. Дълбочина на камерата 0,1 мм.

Решетката на Goryaev, приложена към дъното на камерата, е квадратна. Страната му е 3 mm, площта е 9 mm2. Мрежата е разделена на 225 големи квадрата - 15 хоризонтално и 15 вертикално. Част от големите квадрати (след два до трети) е разделена на 16 малки квадрата. Страната на малкия квадрат е 1/20 mm (фиг. 38).

Техника на броене. Правилното запълване на камерата за броене с разредена кръв гарантира точността на преброяването на униформените елементи. Преди пълнене на камерата, съдържанието на епруветката се смесва чрез въртене между дланите за 2 минути. Разредена кръв се нанася върху средната пластина на камерата с пастьорска пипета с балон или стъклена пръчка, като се поставя близо до ръба на покривното стъкло. Според закона за капилярността течността тече под стъклото, изпълвайки камерата.

След напълване камерата трябва да се постави на масата за 2-3 минути, докато движението на течността в нея спре и клетките се установят неподвижно на фона на квадратите на решетката. При пълнене на камерата течността не трябва да се оттича в браздите. Въздушните мехурчета не трябва да влизат в камерата.

Броенето се извършва под микроскоп с ниско увеличение (том 8, приблизително 10 или 15), кондензаторът трябва да бъде спуснат и диафрагмата затворена.

Еритроцитите се преброяват в 5 големи квадрата от решетката на Горяев, разделени на 16 малки квадрата и подредени диагонално. Последното условие се дължи на факта, че фасонните елементи не са разпределени абсолютно равномерно върху мрежата и трябва да се броят в различните й участъци.

Броенето на левкоцитите се извършва в 100 големи неразделени квадрата, разположени в мрежата в групи от по четири.

За да не се броят двойно едни и същи клетки, лежащи на граничните линии, трябва да се наблюдава следвайки правилата: клетки принадлежат на този квадрат, които са разположени с по-голямата си половина вътре в него; клетките, разделени от гранична линия наполовина, се броят само на горната и лявата граница на квадрата; клетките, разположени в по-голямата си част отвън даден квадратизобщо не се броят.

След преброяване на еритроцитите в камерата се определя броят им в 1 μl кръв. За да направите това, броят на червените кръвни клетки, получен чрез преброяване, се умножава по 10 000. Този коефициент се получава чрез следното изчисление: 1 голям квадрат от решетката съдържа 16 малки квадрата, а 5 големи квадрата - 80 малки квадрата (16-5 ). Малка квадратна страна

е равно на "/th mm, а площта му е "/u-"/20="/"o mm2. Височината ^ на камерата "/ u mm, следователно обемът на кръвта над малкия квадрат е:

1 1 1 z 400 "l0 4000 MM

се равнява. Както е посочено, обемът на кръвта над малкия квадрат

е равно на - mm3, следователно, за да разберете броя на еритроцитите в 1 μl, т.е. в обем 4000 пъти по-голям, е необходимо броят на еритроцитите, съдържащи се в един малък квадрат ^, да се умножи по 4000.

Кръвта за броене на еритроцитите се разрежда 200 пъти. За да разберете броя на червените кръвни клетки в цяла кръв, получената фракция се умножава по разреждането:

Този математически израз може да бъде pre80

представени под формата на фактори:

Дробният фактор се състои от постоянни стойности. Когато се преброят, се получават 10 000 и целият израз приема следната форма: a -10 000. И така, броят на еритроцитите в 1 μl кръв е равен на броя на еритроцитите, преброени в пет големи квадрата на решетката на Горяев, умножени с 10 000.

Например: 427 еритроцита са преброени в 5 големи квадрата на решетката на Горяев. В 1 µl кръв броят на еритроцитите ще бъде 427-10 000 = 4 270 000, или 4,27-106.

За да определите съдържанието на червени кръвни клетки в 1 литър кръв, трябва да умножите броя на червените кръвни клетки, изразен в милиони, по 10. В нашия пример броят на червените кръвни клетки в 1 литър кръв е 4,